q 최적의 농축 실험 결과를 위한 Tips

멤브레인 MWCO(Molecular Weight Cut-Off) 선택은?

최상의 회수율을 얻기 위해서, 농축하려는 물질의 분자량에 비해 1/2 ~ 1/3 크기의 멤브레인 MWCO를 선택합니다.

(예) 농축하려는 Target 단백질 분자량이“90,000 MW”인 경우

☞ Vivaspin 30,000 MWCO 선택

농축 실험 시간에 영향을 주는 요인들은?

MWCO, 유공성 (porosity), 시료 농도 , 점도 , 원심분리 속도 , 온도 등이 있습니다.

(예) 버퍼 안에 단백질이 5% 이상이면, 농축 속도가 현저히 떨어짐

(예) 4 ℃에서 실험하는 경우, 25℃에서 실험하는 것보다 1.5배 느려짐

(예) 50% 글리세린과 같은 점도가 높은 시료로 실험하게 되면, 일반 버퍼 내의 시료를 이용한 실험보다 최대 5배 이상의 시간이 소요됨.

실험 전, 필터 전처리 필요성은?

농축 멤브레인에는 보습제인 극미량의 글리세린과 Sodium azide( 아지드화 나트륨 ) 이 함유되어 있습니다. 따라서 실험 전, 전처리를 추천합니다.

[방법]

1. 단백질 용액에 사용되는 동일한 버퍼 또는 초순수를 채워 놓는다.

2. 실험 전, 여과 튜브에 흘러 나온 액은 버리고, 필터를 원심기로 돌려준 후, 농축 실험 시작!

(주의! 멤브레인을 마른 상태로 두지 말 것!)